放烧复合伤及其神经内分泌治疗

放射复合伤多发生于核事故、核战争及核恐怖袭击中,受到国内外的高度重视^[1-2]。放烧复合伤(即放射损伤合并烧伤)是其中最为常见的一种,在发病早期即表现出复杂的病理改变,最主要的特征是造血功能障碍、免疫调节紊乱、胃肠道功能受损、烧伤创面的延迟愈合和急性炎性反应^[3]。在整个放烧复合伤(尤其是重度及以上放烧复合伤)病程中,各个病理发生环节之间的交互影响使得病情逐渐加重和恶化,同时也使放烧复合伤的治疗变得极为棘手,迫切需要寻找新的有效的治疗方法。因此,通过调节神经内分泌系统来达到治疗目的的方法就应运而生。本文就此方面的研究进展作一简述。     

小鼠皮肤创伤后创面局部真皮干细胞参与修复过程

目的 研究小鼠皮肤创伤后,创面局部的真皮干细胞是否被激活并参与创伤愈合过程.方法 小鼠背部行全层皮肤损伤后,首先应用腹腔单次注射BrdU 2 h后标记快速分裂细胞(rapidly dividing cells,RDCs),检测创面局部组织中不同时间点细胞增殖反应情况;其次通过多次连续注射BrdU长时间后在体检测标记存留细胞(label-retaining cells,LRCs),以反映创伤后局部真皮干细胞被激活情况;最后分离BrdU在体多次连续标记后的肉芽组织细胞和正常真皮细胞,通过比较其集落形成能力并检测BrdU信号存留情况,研究肉芽组织中真皮干细胞被激活和参与修复的情况.结果 单次注射BrdU 2 h后,在正常皮肤组织中,仅在表皮基底层和毛囊上皮细胞中存在少量的BrdU阳性细胞,而创伤后在创缘表皮、毛囊、创缘真皮和肉芽组织细胞都发生了明显的增殖反应;创伤后多次连续注射BrdU 3 d后,通过长时间示踪,证实创面愈合后肉芽组织中存在LRCs,而在正常真皮组织中未检测到被BrdU标记的细胞;进一步发现肉芽组织细胞较正常真皮细胞具有更强的集落形成能力,且在肉芽组织细胞形成的集落中仍可检测到BrdU信号阳性的LRCs.结论 创面肉芽组织中存在具有干细胞特性的LRCs,提示皮肤创伤后局部真皮干细胞被激活并参与创伤愈合过程.     

单宁酸对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用

目的 研究单宁酸(tannic acid,TA)对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养巨核细胞株M07e,经0、0.5、1、2.5、5、10 μg/mL单宁酸预处理后给予10 Gy60Co γ射线照射,继续培养不同时间,采用MTT法、荧光酶标仪检测法和流式细胞术检测技术分别检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和凋亡率变化.给予BALB/c小鼠5 Gy60Co γ射线全身一次性照射,复制急性放射损伤实验动物模型,设置生理盐水对照组和TA灌胃预处理组,通过尾静脉外周血常规检测和骨髓病理切片观察,分析血小板水平和骨髓巨核细胞数目变化情况.结果 TA能够剂量依赖性地提高受照巨核细胞的存活率;与单纯辐照组相比,TA预处理可以显著降低细胞内总ROS水平(P＜0.01)、提高细胞线粒体膜电位(P＜0.05)和降低细胞凋亡率(P＜0.05).动物实验结果显示,TA预处理能够显著抑制辐射损伤引起的骨髓巨核细胞数量减少,照后第7、12、15、19天时TA处理组血小板水平显著高于对照组(P ＜0.05,P＜0.01).结论 TA对电离辐射所致巨核细胞损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与其突出的抗氧化应激活性有关.     

照前给予去甲肾上腺素增强电离辐射对小鼠血小板生成能力的损伤作用

目的 探讨去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对电离辐射(ionizing radiation,IR)损伤小鼠血小板水平的影响作用.方法 80只健康雄性C57BL/6小鼠按完全随机的方法分为未辐射对照组(PBS)、未辐射给药组(NE)、辐射对照组(PBS +IR)和辐射给药组(NE+ IR),每组20只小鼠.给药组给予腹腔注射NE(1.5 mg/kg),对照组给予腹腔注射等体积PBS,处理24 h后辐射组进行全身一次性6 Gyγ射线照射.辐射后不同时间点尾静脉采血检测小鼠血常规,并于辐射后第9天使用HE染色观察小鼠骨髓变化,流式细胞术分析小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)比例变化以及巨核细胞凋亡、周期的变化.结果 未辐射时,NE组小鼠给药后3～10 d血小板数量显著高于PBS组(P ＜0.05);HSCs占骨髓Lineage细胞的比例:NE组为(1.44±0.08)％,PBS组为(1.05±0.10)％,两组差异具有统计学意义(P＜0.05);同时,NE也具有促进离体培养小鼠HSCs的增殖,并且在药物浓度100 nmol/mL的范围内具有剂量效应依赖关系;HE染色显示,NE组的骨髓有核细胞和巨核细胞数目显著高于PBS组(P＜0.05);巨核系祖细胞周期的结果显示,NE组G0/G1期细胞百分比减少约(12.10±3.12)％、S期细胞比例增加约(8.78±1.05)％,与PBS组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).辐射后,NE+ IR组小鼠7～ 25d血小板数量低于PBS+ IR组(P ＜0.05);HSCs占骨髓Lineage细胞的比例:NE+ IR组为(0.07±0.01)％,PBS+ IR组为(0.27±0.03)％,两组差异具有统计学意义(P＜0.05);HE染色结果显示,NE+ IR组的骨髓有核细胞和巨核细胞数目显著低于PBS+IR组(P＜0.05);巨核祖细胞凋亡结果显示,NE+ IR组凋亡率为(84.46±5.09)％,明显高于PBS+ IR组[(54.18±3.18)％,(P＜0.05)].结论 去甲肾上腺素使造血干细胞、巨核祖细胞过度活化,从而增加了小鼠对电离辐射的敏感性,使血小板生成减少.     

电离辐射对小鼠肠道隐窝素4表达的影响及意义

目的检测小鼠受电离辐射后隐窝素4(cryptdin 4,Crp4)的表达变化,探讨其在电离辐射肠损伤中的生物学意义。方法 8周龄BALB/c小鼠采用随机数字表法分为两组,未辐照组(n=5)和辐照组(n=15),辐照组给予8 Gy X射线全身一次性照射,分别于照后9、24、72 h取小鼠小肠组织和眼球血。免疫组织化学染色和Western blot分析小鼠小肠Paneth细胞隐窝素Crp4的表达变化,鲎试剂法检测小鼠血清LPS水平。化学合成Crp4多肽,采用涂布克隆计数法分析Crp4对肠道条件致病菌(大肠杆菌、粪肠球菌)和益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌)的抗菌活性;同时,观察Crp4对LPS诱导促炎因子IL-1β生成的影响。结果与对照组相比,小鼠电离辐射后小肠Crp4表达水平升高,72 h升高尤为显著(P<0.01);辐照小鼠血清LPS含量在9 h后显著增加(P<0.05),72 h后升高最为明显(P<0.01);Crp4对条件致病菌(大肠杆菌、粪肠球菌)的抗菌活性显著强于益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌),并能抑制LPS诱导单核巨噬细胞IL-1β的生成(P<0.01)。结论电离辐射可以诱导小鼠肠道隐窝素Crp4的表达上调,Crp4表达上调可发挥调节肠道菌群、减轻机体炎症反应的作用。